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HIV核酸检测

 

HIV基因结构

HIV基因组由两条单链RNA组成,每个RNA基因组约为9.7k,在RNA5′端有一帽结构(m7G5ppp5′GmpNp),3′端有poly(A)尾巴。HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同,均由5′末端长重复(long terminal repeat, LTR)、结构蛋白编码区(gag)、蛋白酶编码区(pro)、具有多种酶活性的蛋白编码区(pol)、外膜蛋白(env)和3′末端的长重复LTR区组成。

 

HIV基因组由两条单链RNA组成,由5′末端长重复、结构蛋白编码区、蛋白酶编码区、具有多种酶活性的蛋白编码区、外膜蛋白和3′末端的长重复LTR区组成。
 
HIV核酸检测是最快发现感染的手段
人体感染HIV后,一般需要2-12周,平均42天左右血液中才可检测到HIV抗体。在这段时期内,常规检测技术根本无法检测出HIV病毒,这就是常说的“HIV窗口期”。“窗口期”的存在,也解释了为什么一些病人在接受了正规医院输血后却感染艾滋病的原因。


在感染过程中,首先出现的是病毒RNA,这是可以用PCR的方法检测出来,之后出现的是IgM抗体,使用双抗原夹心法即可以检测出来,然后出现的是IgG抗体,使用间接法可以检测出来。

 

现在省市疾病控制中心和检测试纸,使用的检测方法都是检测抗体抗原,无法避免“HIV窗口期”因素的干扰。所以说,常规检测技术在HIV窗口期内存在重大缺陷。


HIV核酸检测,是直击HIV病毒的 RNA结构,检测血液中是否存在病毒核酸,诊断有无病原体感染。采用PCR技术,使用分子生物学实验室通用的扩增试剂和自行研究开发设计的复合引物,覆盖常见的HIV毒株,具有很高的灵敏度。使用二次扩增的套式PCR扩增方法,提高检测的特异性,降低假阳性的概率。

 

应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术


根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction,nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增,其产物再经内侧引物扩增,直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100~1000倍,可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。
根据专业文献记载,用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性,而61名健康人和可疑者均为阴性,后者经追踪检测抗体排除了HIV-1感染。


由此可知,nPCR是一种敏感性极高、特异性很强、操作简便易行的HIV-1基因检测技术。它已经在早期诊断和外周血病毒含量检测中发挥了重要作用,而且有着更广阔的应用前景。

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